(no subject)
Dec. 19th, 2017 12:31 pm![[personal profile]](https://www.dreamwidth.org/img/silk/identity/user.png){kind=small}
aridmoorsНу все, они меня бесят. Сил моих нет.
Короче, я работаю с нервными стволовыми клетками. И у них есть какая-то странная особенность, про которую ничего нет в литературе. Ну мало ли чего в литературе нет... ну в общем, короче, они обрастают какими-то соплями. И для меня это огромная проблема.
Не в смысле соплями, там, заразными бактериями или грибками или чем-то таким плохим, нет. Они обрастают соплями, которые они сами производят и секретируют вовне себя! И потом они друг с другом этими соплями связываются! И это капец какая проблема, потому что эти сопли не разрушаются трипсином, и в итоге я после нескольких пересадок клеток из тарелки в тарелку оказываюсь один на один с такой длииииииииной нитью-соплей, на которой, как бусины, висят все мои клетки!!! И их хрен оттуда сколупаешь! То есть они оказываются связаны друг с другом, и при этом, сволочи, округляются, и висят на этой сопле как длинные бусы. И что самое главное, продолжают размножаться! И даже еще сильнее, чем когда они были распластаны по тарелке.
Почему я говорю, что это сопли - потому что я пробовала такие клетки собирать и, например, готовить из них сэмпл для вестерн блота. И когда я туда складываю SDS, они становятся не просто вязкими, а МЕГА-вязкими. И даже просто если их пипетить вверх-вниз, они вязкие, как сопли. Более того - и что меня бесит больше всего, и из-за чего я собственно весь пост-то начала - это что когда их центрифугируешь, они не падают вниз! Эти сволочные сопли легче стандартных жидкостей, и они держат клетки, на них повисшие, на поверхности! И даже если центрифугировать долго, то все клетки вроде собираются внизу, но наиболее "сопливые" торчат таким облаком над ними. И короче когда пытаешься высосать жидкость лишнюю, ТО БЛИН ВСЁ ЦЕПЛЯЕТСЯ, и все клетки высасываются нафиг!!! И я остаюсь как дура без сэмпла. И всё из-за этих соплей.
Эти сопли можно уничтожить. Когда такие клетки собрать, засунуть в CELL BANKER и заморозить в -80, а потом на следующий день достать, соплей больше нет, и те же самые клетки спокойно ложатся на дно тарелки, приклеиваются и растут как нормальные клетки. Но уже на следющий день начинааааается. Сначала немножко соплей. Потом еще. Потом еще. И в конце концов у меня опять эти сопливые бусы вместо клеток.
И короче знаете чё? Я сначала думала, что это я при трипсинировании плохо разъединяю клетки, надо побольше их пипеть вверх-вниз, чтоб разъединить все. Так они прикиньте что? Они из-за этого ещё больше соплями обрастают. Реальная закономерность. Чем больше их разбулькаешь (там прям цвет медиума меняется, из-за того что много воздуха набулькивается в результате) - тем сопливее они будут, когда их высадишь в тарелку. Один раз я сильно-сильно набулькала, так они вообще почти не приклеились к тарелке, я пришла и обнаружила, что они уже все на этих соплях плавают, округлившиеся, и не ложатся на дно.
Они меня забесили. Главное, меня раздражает, что я не знаю, что это такое! Что хрень, WTF вообще?
Короче всё. Я соберу эти бусы, соберу клетки после разморозки, пробегу их на CBB и - если дай бог обнаружится разница - я ее вырежу и отправлю на масспек. Я так больше жить не могу. Что за сопли-то!?
Если у кого еще есть идеи или гипотезы насчет этих соплей, давайте, я буду всё проверять. Они меня выбесили, я теперь не успокоюсь, пока не выясню, что за сопли.
Короче, я работаю с нервными стволовыми клетками. И у них есть какая-то странная особенность, про которую ничего нет в литературе. Ну мало ли чего в литературе нет... ну в общем, короче, они обрастают какими-то соплями. И для меня это огромная проблема.
Не в смысле соплями, там, заразными бактериями или грибками или чем-то таким плохим, нет. Они обрастают соплями, которые они сами производят и секретируют вовне себя! И потом они друг с другом этими соплями связываются! И это капец какая проблема, потому что эти сопли не разрушаются трипсином, и в итоге я после нескольких пересадок клеток из тарелки в тарелку оказываюсь один на один с такой длииииииииной нитью-соплей, на которой, как бусины, висят все мои клетки!!! И их хрен оттуда сколупаешь! То есть они оказываются связаны друг с другом, и при этом, сволочи, округляются, и висят на этой сопле как длинные бусы. И что самое главное, продолжают размножаться! И даже еще сильнее, чем когда они были распластаны по тарелке.
Почему я говорю, что это сопли - потому что я пробовала такие клетки собирать и, например, готовить из них сэмпл для вестерн блота. И когда я туда складываю SDS, они становятся не просто вязкими, а МЕГА-вязкими. И даже просто если их пипетить вверх-вниз, они вязкие, как сопли. Более того - и что меня бесит больше всего, и из-за чего я собственно весь пост-то начала - это что когда их центрифугируешь, они не падают вниз! Эти сволочные сопли легче стандартных жидкостей, и они держат клетки, на них повисшие, на поверхности! И даже если центрифугировать долго, то все клетки вроде собираются внизу, но наиболее "сопливые" торчат таким облаком над ними. И короче когда пытаешься высосать жидкость лишнюю, ТО БЛИН ВСЁ ЦЕПЛЯЕТСЯ, и все клетки высасываются нафиг!!! И я остаюсь как дура без сэмпла. И всё из-за этих соплей.
Эти сопли можно уничтожить. Когда такие клетки собрать, засунуть в CELL BANKER и заморозить в -80, а потом на следующий день достать, соплей больше нет, и те же самые клетки спокойно ложатся на дно тарелки, приклеиваются и растут как нормальные клетки. Но уже на следющий день начинааааается. Сначала немножко соплей. Потом еще. Потом еще. И в конце концов у меня опять эти сопливые бусы вместо клеток.
И короче знаете чё? Я сначала думала, что это я при трипсинировании плохо разъединяю клетки, надо побольше их пипеть вверх-вниз, чтоб разъединить все. Так они прикиньте что? Они из-за этого ещё больше соплями обрастают. Реальная закономерность. Чем больше их разбулькаешь (там прям цвет медиума меняется, из-за того что много воздуха набулькивается в результате) - тем сопливее они будут, когда их высадишь в тарелку. Один раз я сильно-сильно набулькала, так они вообще почти не приклеились к тарелке, я пришла и обнаружила, что они уже все на этих соплях плавают, округлившиеся, и не ложатся на дно.
Они меня забесили. Главное, меня раздражает, что я не знаю, что это такое! Что хрень, WTF вообще?
Короче всё. Я соберу эти бусы, соберу клетки после разморозки, пробегу их на CBB и - если дай бог обнаружится разница - я ее вырежу и отправлю на масспек. Я так больше жить не могу. Что за сопли-то!?
Если у кого еще есть идеи или гипотезы насчет этих соплей, давайте, я буду всё проверять. Они меня выбесили, я теперь не успокоюсь, пока не выясню, что за сопли.
![[identity profile]](https://www.dreamwidth.org/img/silk/identity/openid.png){kind=small}
no subject
Date: 2017-12-19 03:41 am (UTC)Стволовые – это же такие с потенциалом строителя?
Ну, то есть, я бы посмотрела во что эти сопли вырастут через неделю-месяц-год. Это сейчас они сопли, а вдруг они окостенеют :D
no subject
Date: 2017-12-19 03:52 am (UTC)мозг у них уже есть
Date: 2017-12-19 04:25 am (UTC)no subject
Date: 2017-12-19 03:54 am (UTC)no subject
Date: 2017-12-19 08:41 am (UTC)no subject
Date: 2017-12-19 03:51 am (UTC)Но я сомневаюсь, что мне так же повезет. Я вообще че-то конкретно невезучая в последнее время. Но мне просто хочется знать, ну блин, что за сопли, почему я так мучаюсь? Я опять сегодня высосала клетки, которые растила-растила... как это бесит, это капец! Ведь ждешь же, ходишь, проверяешь, меняешь им воду, потом ага, наконец-то можно собирать - и БАЦ, всё высосалось в мусорку. Капец.
no subject
Date: 2017-12-19 09:48 pm (UTC)no subject
Date: 2017-12-20 11:19 pm (UTC)no subject
Date: 2017-12-19 04:04 am (UTC)no subject
Date: 2017-12-19 04:27 am (UTC)и публиковать
Методические статьи больше цитируются!
no subject
Date: 2017-12-19 04:34 am (UTC)Любая слизь это сложная штука, случайно её не сделать.
Нужны высокомолекулярные цепочки (аксоны?) и гидрофильные комплексы
no subject
Date: 2017-12-19 05:17 am (UTC)(вопросы риторические, нихт?)
no subject
Date: 2017-12-19 05:53 am (UTC)Это нобелевка. Механика объединения клеток в симбиотические структуры. Они меняют среду под себя.
no subject
Date: 2017-12-19 07:12 am (UTC)no subject
Date: 2017-12-19 07:34 am (UTC)no subject
Date: 2017-12-19 11:27 am (UTC)no subject
Date: 2017-12-19 12:21 pm (UTC)no subject
Date: 2017-12-19 07:51 am (UTC)А вот и тема для статьи.
no subject
Date: 2017-12-19 08:13 am (UTC)no subject
Date: 2017-12-19 01:16 pm (UTC)no subject
Date: 2017-12-19 01:33 pm (UTC)Все так ошибаются. :))) Но нет, он по основной работе http://virology.gamaleya.org/index.php?option=com_content&view=article&id=196:lisitsyn-fedor-viktorovich&catid=90&Itemid=521
no subject
Date: 2017-12-19 09:50 pm (UTC)no subject
Date: 2017-12-19 10:05 pm (UTC)no subject
Date: 2017-12-20 04:16 pm (UTC)Специалисты или плотно интересующиеся чем-то знают свою область лучше, но в остальных плавают.
no subject
Date: 2017-12-20 11:20 pm (UTC)Ну в смысле когда такая резко обожествляющая характеристика, то она производит обратный эффект - причем сам же характеризуемый не виноват, его тут вообще не было, его без спроса обожествили:)
no subject
Date: 2017-12-19 09:54 am (UTC)Пытаются образовать нервную систему
Date: 2017-12-19 11:16 am (UTC)Re: Пытаются образовать нервную систему
Date: 2017-12-19 12:47 pm (UTC)no subject
Date: 2017-12-19 11:33 am (UTC)А так-то да, та самая статья в нейчуре. Нужно срочно состав определять!
no subject
Date: 2017-12-19 12:37 pm (UTC)no subject
Date: 2017-12-19 12:20 pm (UTC)no subject
Date: 2017-12-19 12:57 pm (UTC)no subject
Date: 2017-12-19 09:54 pm (UTC)no subject
Date: 2017-12-19 10:15 pm (UTC)Покопался - то же нет идей. Либо вы набрели на какой то реально никому не известный эффект (такое как раз бывает) либо какая то хитровывернутая контаминация.
Это в общем сильно не моя тема (я вирусолог, причем папилломавирусы в частном и техники электронной микроскопии в общем) - но вот эта статья вам может помочь или нет https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11095732
Если меня не плющит у них то же что то типа глии перло...
no subject
Date: 2017-12-19 06:32 pm (UTC)Слизь иногда в самых разнообразных культурах появляется, (даже в эритроцитах). И самого разного состава. И всегда очень некстати.
Надо смотреть, какие в этой слизи основные связи, если их порезать - вся сразу разжижается...
А какая реакция на гипертонический раствор?
PS: Чтобы помочь трипсину добраться до белков можно попробовать постучать(минимально повибрировать) по матрасикам.
PPS: О кинетике реакций в вязкой среде на колде ничего не рассказывали. Тут скорее теория перколяции в помощь...
PPPS: Обильное появление слизи может свидетельствовать о массовой гибели клеток.
no subject
Date: 2017-12-19 08:42 pm (UTC)no subject
Date: 2017-12-19 08:43 pm (UTC)Но я не настоящий сварщик, если чё.
no subject
Date: 2017-12-19 09:29 pm (UTC)no subject
Date: 2017-12-19 09:41 pm (UTC)no subject
Date: 2017-12-19 09:54 pm (UTC)Впрочем, попробую все равно.
no subject
Date: 2017-12-29 09:05 pm (UTC)у вас тут триллер какой-то! ждем продолжения
no subject
Date: 2017-12-23 06:19 pm (UTC)По описанию
> А сопли тоньше, они почти совсем в микроскоп не видны,
> там надо под определенным углом и знать куда смотреть,
> и то будет видно только тоооненькая ниточка.
очень уж на Tunneling nanotubes (TNT) смахивает. Вот например (ссылки вставлю в явном виде, чтоб спаморезка не почикала):
http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0033093
http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/febs.13946/full
Про свойство стволовых нервных клеток ничего не знаю, но подозреваю, что одна из их особенностей может быть тенденция у установлению множественных связей с другими клетками (как нейроны). А с учетом
> их история темновата
вполне может быть что там чего-нть намутировало по этой части.
no subject
Date: 2018-01-04 08:52 pm (UTC)Я бы покрасила DAPI и посмотрела на флюоресцентном микроскопе (быстрее всего выявляет тихую бактериальную контаминацию). Но я известный параноик.
no subject
Date: 2018-05-01 09:21 pm (UTC)