(no subject)

[aridmoors]

Я знаю кунг-фу

Я вернулась с семинара по микроскопии. Было физически очень тяжело, я на четвертый день сломалась и уехала болеть в отель, пока все считали данные FRAP. Эти люди сумасшедшие. Реально сумасшедшие. У нас был день - в 8 утра надо быть внизу в фойе отеля, всех садят в автобус и увозят в чистое поле, где стоит закрытое НИИ, откуда никак нельзя выйти (все за забором, выход с разрешения).

И до 11 вечера (я не преувеличиваю, до 11 pm) все занимаются микроскопией. Перерыв на обед? А нафига вам обед, за 15 минут сбегаете успеете, мне тут досказать надо важную информацию.

Это был какой-то дикий экстрим, я так не могу. Для меня, во-первых, это было великое прозрение по поводу того, какое реально крутое достижение 8-часовой рабочий день. Я раньше никогда не пробовала работать без перерыва (вот прям чтоб реально без перерыва, полноценной напряженной работы) 12 часов в сутки. А вот сейчас мне стало понятно, почему, если человека заставить так работать, то он запросто может в 30 умереть.

То есть это была такая экскурсия в прошлое для меня. Хотите попробовать жить как в 19 веке? Вуаля!

С другой стороны, для меня это была охрененно классная вещь. Я вообще-то стихийный микроскопист. Меня как бы учили, но теории не давали. Да ее в общем очень долго и сложно давать, теорию современных микроскопов. Но у меня была возможность очень близко с микроскопами работать. И я выработала ряд навыков, которые можно себе представить как-то так:

------
Вот у вас космический корабль. В нем есть пилотная палуба, на которой огромный экран во всю стену и гигантская панель с кучей непонятных циферблатов, кнопок и указателей. И вот вы видите: пилот заходит в это помещение, смотрит на все эти указатели и начинает так примееееерно делать как-то вот туда и куда-то как-нибудь так. В целом корабль летит правильно. Но если пилота спросить нахрена он вот все это делал, он не знает.
-------

Я именно так управляла микроскопом до этой недели. То есть если сказать честно, положа руку на сердце, то управляла я микроскопами правильно. Но почему я так делала, и какой за всем этим стоит принцип - я не знала. У меня это все было стихийно и инстинктивно. А теперь я зато знаю, почему именно я раскрываю pinhole, и зачем я поднимаю HV, и почему я пытаюсь опустить offset, и так далее. И вообще теперь меня можно посадить в абсолютно любой космический корабль, что прекрасно и удивительно.

Comments

[tojime.livejournal.com]

Поздравляю! Такое всегда очень приятно (я про микроскопию, а не про двенадцатичасовой рабочий день).

[aridmoors.livejournal.com]

Да, я очень рада, что получила такие навыки. Самое интересное, что раньше я думала, что давать теорию бессмысленно - все равно надо будет каждый микроскоп отдельно изучать (у них очень разные функции, у каждой фирмы свои особенности), но я была неправа. Когда нам дали глубоко оптику, основы съемки флуоресцентных молекул (особенности расчетов движения этих молекул в сочетании с расчетами по возможностям современных микроскопов - физические пределы того, что может и не может регистрировать камера), то стало намного, намного понятнее.

Главное, что давали с практикой сразу же, и что дали работать на всех микроскопах (всех производителей, Leica, Zeiss, Olympus, Nikon), и на всех главных типах (wide field, LSM, spinning disk и так далее).

[vadperez.livejournal.com]

как насчет прозрения по-поводу свободных выходных?;)

[aridmoors.livejournal.com]

А выходные у нас, кстати, были свободными. Все было с понедельника по пятницу.

Впрочем, японцы никогда не работают в таком режиме, когда находятся в лаборатории, даже если они там находятся с 8 до 11. В Японии спокойно можно уйти с рабочего места по своим делам (в науке, во всяком случае), да и много людей время от времени расслабляются и просматривают новостные сайты или шоппинг-сайты. Т.е. это не напряженная работа без перерыва. Ну и в целом на работе люди намного расслабленнее, чем на западе, т.к. в Японии часто стремятся поддерживать доброжелательную и дружескую атмосферу на работе (это может быть незаметно тем, кто не говорит по-японски, кстати - у нас как раз одна девушка тут заканчивает, и у нее страшный стресс, т.к. она не понимает японского, а при ней часто говорят по-японски, и ей кажется, что ее никто не поддерживает, и еще ей непонятно как себя вести, что можно, что нельзя, как к ней относятся и т.д. - это дикий стресс, мне ее прямо жалко).

[vadperez.livejournal.com]

)) в смысле, это а академии? про фирмы наслышан легенд...
а что за техники рассмотрели? особенно из новых?

пд
на даймондзи смогли сходить?

[aridmoors.livejournal.com]

В фирмах не работала, не знаю, но уверена, что аспект доброжелательности (т.е. отсутствия стрессовости из-за личностных проблем, там типа кто-то с кем-то поссорился) присутствует. Вообще меня, например, сильно парит, когда я не могу доверять кому-то на рабочем месте. В Японии почти всем можно доверять. То есть не бывает такого, чтоб человек сознательно замышлял злое против кого-то, это чисто западная фигня. Поэтому стресса чисто на личном уровне тут меньше. Тут могут тебя не любить, потому что ты раздолбай, но такого, чтоб там, тебе прям вот зла желали из-за карьерной конкурентности или просто по сучности - это редко.

Нам дали все порядку на семинаре. Сначала нам объяснили, в чем смысл световой микроскопии, как именно происходит увеличение, дали азы микро-оптики. Затем была практическая сессия, на которой каждый чел построил микроскоп (х20) из выданных линз, камеры и линейки. Там надо было уже регулировать яркость, четкость, все это прочувствовали своими руками, на какой линзе и какой shibori (эээ... кружочек? дырочка? сужение?) это возникает. Ну микроскоп же состоит из линз и этих shibori, в смысле барьеров, которые свет ограничивают.

Потом была практическая сессия, когда мы разбирали wide field микроскопы, смотрели внутреннее устройство, учились менять ртутные лампы, а затем учились менять и настраивать кубики с фильтрами и стеклом (для флуоресценции). Это было круто, очень помогло понять, как все работает. То есть щас я смогу собрать микроскоп, если мне его привезут разобранным, т.к. я понимаю, зачем части нужны и в каком месте они выполняют функцию. Попутно рассмотрели разные виды wide field.

На второй день перешли выше, на 3D-съемку реальным wide filed микроскопом. Тут уже нам дали а) теорию флуоресценции, б) теорию линз (т.е. что именно определяет качество линзы и качество съемки, как возникает образ объекта и почему линзы бывают воздушные, водные, масляные и про преломление; объяснили про эффекты хало и почему нитевые объекты типа актинового волокна в 3D выглядят продолговатыми вместо круглыми, почему снимать в центре лучше, чем на периферии, как физически достигается увеличение разрешения и т.д.)

Потом была практика, где все сняли клетку в 3D своими руками, а затем выполняли деконволюцию. Вот с деконволюцией был затык, во всяком случае в моей группе (мы были поделены на группы), т.к. нам, к сожалению, не досталось спецов по деконволюции. Получили только азы: про что такое перевод в Фурье, какая формула, какой принцип и зачем. А сам процесс особо не рассматривали, к сожалению. Там очень много нюансов, но вот нам не досталось.

Третий - пятый день был посвящен полностью конфокальной микроскопии. Рассмотрели принцип, зачем нужна pinhole, затем всю систему, а затем перешли к фичам. Из фичей была spinning disk (несколько штук нового дизайна, щас не вспомню, но если походить по сайтам компаний, у них все есть) и супер-разрешение.

Если вам интересен совет, то советую: не связывайтесь с Никоном. Не очень рекомендую Leica. Олимпус последних моделей ОК (не берите старые, особенно не берите Olympus FV1000, вот 1200 - это небо и земля, 1200 это отличный микроскоп). Про Zeiss не могу сказать ничего дурного, можно брать. Если нужен универсальный микроскоп, берите стандарный хороший конфокальный, не разменивайтесь на spinning disk и прочие навороченности, это реклама. Все, что делается на этих микроскопах, по сути можно сделать на конфокальном, поиграв с настройками, а конфокальная микроскопия на настоящий момент - лучшее, что имеется у человечества из световой микроскопии. Главные 2 параметра, которые все решают - это качество линзы и качество камеры. Не берите CCD камеры, берите или EMCCD или еще новее. Линза крайне важна при молекулярной съемке (т.к. при высоком разрешении есть коэффициенты смещения), но не очень важна при съемке на уровне "вся клетка", "кусок ткани". Супер-разрешение нужно только тем, кто работает с актином или microtubules, или с отдельными молекулами, остальным можно фотать очень красивые фотки и без этого.

[alexispokrovski.livejournal.com]

Отличный семинар! Если даже про конволюцию-деконволюцию давали, то это просто отлично.

Без азов математики это должно быть взрыв мозга.

[aosypov.livejournal.com]

Если оптика микроскопирования не принципиально отличается от фотографической ;) - shibori это скорее всего диафрагма. Зажимают, чтобы получить параксиальную оптику (меньше искажений) и увеличить глубину резко изображенного пространства. При этом уменьшается количество света и возрастают краевые эффекты (дифракция).

[aridmoors.livejournal.com]

А! О. Да. Диафрагма.

[vadperez.livejournal.com]

понятно, дали базу.
А чем Никон так провинился?

* конфокальный работает с ФЭУ, а не с камерой;)
на самом деле микроскоп следует подбирать под задачу - конфокальный хорош по качеству картинки, но (грубо говоря) для быстрых процессов он не подходит, там надо widefield и камеру. Курс этот ваша лаба организовывала?

[aridmoors.livejournal.com]

С Никоном все время проблемы, как в нашей лабе, так и на курсе у них постоянно что-то выходило из строя. Ни разу я еще не видела никоновский микроскоп, в котором что-нибудь бы не было сломано.

Курс организовывала не наша лаба. Наша лаба не доросла, и чегой-то расти туда не хочет. Я если дорасту, буду участвовать и организовывать.

[vadperez.livejournal.com]

Вы разговаривали с бывшим сотрудником Никон Имейджинг Сента и будущим - Никон Сента оф Экселенс;))
У Длинного-сенсея бывают курсы по визуализации биолюминисценции.
Гамбаре!

[aridmoors.livejournal.com]

Посмотрела Длинного сенсея вебсайт и публикации. Нашла протокол про небритых мышей:) В публикациях там все наши, да. Вообще академический мир какой-то тесный, микроскописты все друг друга знают. С другой стороны, может это и хорошо.

[eylbyf.livejournal.com]

Улыбнуло. Не про микроскопы , а что у нас 12часовой собираются узаконить. Хотя реально любой продавец в маркете работает физически 14 часов в день, и реально 15 минут обедает - потому что иначе не успеет всё переделать. И если камера зафиксировала, что он присел на рабочем месте в торговом зале - то автоматически в конце месяца спишут штраф 100 грн в день.
вы имеете право на 4 перекура по 10 мин в смену - но пока вы сходите за курточкой, без которой выходить - штраф, пока дойдёте - у вас есть 2 мин покурить и вернуться обратно работать.
время, когда вы ходите в туалет, тоже считывается магнитной карточкой, так что если вы там прозаседались, то вполне можете в конце месяца дополнительно рабочую смену или две отпахать, потому что вам часов не хватит.
И как там немцы, предлагают на пенсию в 69 уходить ? Бурные аплодисменты.

[lazy-tank.livejournal.com]

Жесть какая-то. Это типа законно?

[eylbyf.livejournal.com]

Да. и ещё с подпиской о неразглашении, можно в суде за разглашение схлопотать миллионный штраф за ущерб деятельности предприятию.

[kaafree.livejournal.com]

Не садят, а сажают, я Вас умоляю!

[aridmoors.livejournal.com]

Во. Точно. Не заметила.

[alexispokrovski.livejournal.com]

Это, так сказать, традиционная оптическая микроскопия? Потому что физики наизобретали всяких хитрых способов микроскопии, там и поляризации и чего только нет. Трансфокальная вот есть, если правильно помню.

[aridmoors.livejournal.com]

Про трансфокальную ничего не слышала, быстрое гугление ведет только на русскоязычные сайты (мож я че-то не то ищу?).

Нам давали всю световую микроскопию, т.е. все, что на настоящие момент существует с использованием световой информации. Пока что световая микроскопия - лучший способ наблюдения живого микромира.

[alexispokrovski.livejournal.com]

Это экспериментальная технология была для сверхразрешения -- долго объяснять. Могла не выйти в продакшн по тысяче причин.

[aridmoors.livejournal.com]

Блин, какой-то глюк в комментах.

Я говорю, технологии сверх-разрешения бывают разные, но все они достигаются путем математических расчетов (что я и вынесла из недельного вышеуказанного семинара). То есть световой барьер преодолен, но он преодолен математически. То есть, грубо говоря, если у вас есть расплывчатая фотка молекулы (расплывается потому, что световой барьер), то вы можете математически рассчитать, как эта фотка выглядела бы, если бы не была расплывчатой.

Это в принципе важно, но не так чтобы прям. Электронная микроскопия всегда меня восхищала круче. К сожалению, там другие проблемы: все сэмплы должны быть заморожены, а если че-то маленькое надо снять (например, силию), то будешь триста лет стрелять из пушки по воробьям. Наслепо. Почему, собственно, и нет хороших фоток силий электронным микроскопом.

[alexispokrovski.livejournal.com]

Толково вам про сверхразрешение объяснили. Именно математически.

Электронная да, но живое электронным совсем не снять, никак.

[hexacorallia.livejournal.com]

Круто! Я из полуинстинктивных пилотов на Zeiss LSM 700 и 710 (меня учили и объясняли, но по-быстрому), а в последнее время много учила других - пришлось немного подтянуть теорию, пока составляла им краткий Guide :)

Но вообще я считаю, что такими вещами серьезно должны заниматься специальные люди, инженеры по микроскопии. Я учила, потому что инженер долго болел, а людям работать надо. Мне как пользователю детально во всем разбираться, я считаю, не нужно. А еще я не люблю физику, она у меня не усваивается. Например, я знаю про pinhole, но на уровне "чем уже, тем тоньше конфокальный срез" - а как оно там оптически работает, я вроде как понимаю, но как бы не до конца. Своим обучаемым говорю, что научу их работать и делать красивые картинки, а с разными "почему" - плиз обращаться к мануалу в 480 страниц :))

[autumn-jp.livejournal.com]

Ого, прямо трудовой лагерь какой-то. С 8 до 23 мозги не спекаются теорией заниматься? Эксперимент 12 часов делать проще. Хотя, это как со статьями, наверное, главное начать и работать до упора, а то, если отвлечешься, то потом мучительно трудно опять заставить себя сесть за работу.

[aridmoors.livejournal.com]

Мозги не спекаются, но было тяжело физически, потому что сидеть на одном месте без движения.

[wotanhotter.livejournal.com]

а какую-нибудь химию употребляли? ноотропы, стимуляторы? у ученых, говорят, это в принципе распространено не меньше чем у студентов на сессии, а уж биологу вроде бы полагается быть на переднем краю в данном случае... В России обычно дальше простых ноотропила-фенотропила (ну и гуараны от энергетиков) не идут, может, в Японии уже далеко вперед продвинулись? Кто-то из писавших о Японии утверждал, что там в связи с трудоголизмом подобная фарма крайне популярна.