(no subject)
Dec. 15th, 2012 09:57 am![[personal profile]](https://www.dreamwidth.org/img/silk/identity/user.png){kind=small}
aridmoorsВот есть вещи, которые для меня утратили всякую необыкновенность. Я к ним привыкла, и они стали обыденными. Например, что ДНК можно заказать по интернету. Я вот даже сейчас пишу и думаю - эка невидаль, ДНК по интернету. Подумаешь. По интернету еще и не такое можно заказать.
Хотя всего сто лет назад - ну что такое 100 лет в масштабах жизни человечества? - это было даже не научной фантастикой, а просто больным бредом, наверное.
ДНК по интернету.
Да что там 100 лет назад! Вот попробуй я хотя бы объяснить это своему деду... с какого места к этому объяснению подступиться-то... да.
Ну да, все так и есть, заходишь на вебсайт, там форма, заполните, мол, свои данные, давайте свою последовательность, какая у вас там, GATCAGATTTCCCGAGTCTACGATTT? Пожалуйста! Получите с доставкой на дом через полтора дня.
Да.
Ну, ДНК с доставкой получают не просто так, а для специальной цели. Какую попало ДНК нафиг надо, правильно? Что с ней потом делать будешь... А получают в пластиковых пробирочках, размером вот с женский мизинец. И в виде сухого порошка. Только это так говорится - "в виде", а на самом деле никакого вида там нет. Она, ДНК, невидимая потому что. Во-первых, ее мало, а во-вторых, она прозрачная. Поэтому заказал ты, значит, свою ДНК по интернету, пришли тебе два пластиковых женских мизинца, а в них нифига и нет.
Но ты этим не смущаешься, потому что все это сопровождается суровыми бумагами. Вот такими.
Там как следует написано, что в пробирках - ДНК! А надо только ее разбавить буферной жидкостью, и будут тебе самые что ни на есть олигонуклеотиды в растворе.
Только тут тоже хитрость есть. Ведь всякому ясно - ты старался, деньги тратил, покупал какой-то порошок невидимый в пластиковых пробирках, а тут теперь его возьми и разбавь! А ну как он весь по стенкам размазан - почем ты знаешь? Не видно ж нифига! Надо бы его как-то стрясти на дно, и потом уж разбавлять, не боясь, что все это зря.
Но руками ты никак невидимый порошок на дно не стряхнешь. Кто градусник советский тряс в детстве, тот знает - градусник с этой еле видимой металлической ртутью и тот трясти надо уметь. А когда еще и не видно, что трясешь, как трясешь - совсем дело плохо. Поэтому и тут физики напряглись и придумали специальную машину. В нее вставляешь пробирки, а она их раскручивает с большой силой. И весь порошок, или вся жидкость на дно пробирки эффективно сваливается. И даже проверять ничего не надо. Пара секунд - и пожалуйста. Очень удобно. На кухню такую хочу. Эту вот, и еще одну - "вортекс" называется. Для тряски. Когда что-то размешать надо, можно это руками трясти вверх-вниз изо всех сил, как дурак, а можно вот поставить на вортекс на две секунды - и готово, размешает почти что угодно в растворенную пыль - за счет мелкой вибрации. Это тебе не яйца вилкой в стакане крутить для омлета. Да.
Вот это крутилка в крутящемся состоянии. Белое такое размазанное - это с большой скоростью крутится. "Iwaki" написано. А справа vortex - такая черная нашлепка на метллической коробке. На нее рукой прямо ставишь пробирку и прижимаешь, и она вместе с рукой вибрировать начинает от надавливания. И в пробирке все размешивается.
Ну и вот.
Они, нуклеотиды то есть, как правило чего-нибудь означают. Например, они могут означать из себя сигнальную последовательность. Про то, что ЭТО, в котором эта последовательность есть, надо отнести в какое-нибудь место клетки. Например, в ядро. Ну то есть, это наклейка такая - "нести в ядро". Только эта наклейка обозначается такой кучей букв, типа AGATCTACGTACGCA. Химически. Такая вот она.
И вот.
И эту наклейку можно куда-нибудь вклеить. Во что-нибудь. В какой-нибудь протеин. То есть, в код этого протеина. Чтобы потом этот протеин взял и набрался целою кучей в ядре. И светился там зеленым, понимаешь, светом. Чтобы его сфотографировать можно было и фотки куда-нибудь послать или на стену повесить. Вот такие.
Но чтобы все это сделать, надо как минимум сначала свою ДНК склеенную размножить. В бактериях. Например, XL1-Blue. Eschericia coli.
Я вот думаю: что будет, если XL1-Blue в глаз попадет? А то мне попадало. Генное, понимаешь, модифицированное. Но ничего не было. Говорят - иммунная система.
Ну так вот.
Генетики оперируют микролитрами. Микролитр - это такая мелкая капля, что ее и слизнуть-то стыдно. И самое в ней паскудное то, что она на глаз ну ваще практически не отличается от капли в 2 микролитра. То есть накапать на глаз - нет, ну, прямо скажем, никакой возможности! Тем более что иногда надо бывает 0.5 микролитра. Или даже, страшно подумать, 0.3.
Поэтому для правильного накапывания придумали специальные пипетки. Без них вообще ничего бы не удалось. Совсем. Но даже и с ними, прямо я вам скажу, дело туго идет. Ну раз накапать, два накапать - ладно. Но когда 16 пробирок, и в каждую по 5 реактивов, и после каждого наконечник менять - рука отвалится начисто к чертовой матери. Но с пипетками, во всяком случае, можно как-то микролитры отмерять, этого не отнимешь. Микролитр - это вот на кончике этого желтого набалдашника в длину от конца с четверть-ногтя.
Наконечники, которые надо сменять. Пластиковые. Капнул - сменил - выкинул, капнул - сменил - выкинул. Страшное дело.
А накапывают, например, сюда. Рука чисто для масштаба. Это, если мне не ошибает память, 50 микролитров внутрях находятся.
Еще можно вот сюда накапывать. Это называется "эппи" - eppendorf tube.
Чтобы приготовить вектор со своей ДНК, надо взять уже готовый вектор (которые тоже - эка невидаль - продаются), и произвести с ними магические манипуляции. Накапать туда то одной жидкости, то другой, подержать то в тепле, то в холоде (где 16 градусов на 30 минут, а где и комнатной температуры на 5, а когда и два часа 37 градусов - сии магические указания свято хранятся и передаются от учителя к ученику, причем ученик своею ручкой пишет свою собственную колдовскую книгу, и называет ее протоколами), и тогда - трах-тибидох-тибидох! - получится магическая водичка!
А 16 градусов вот в такой машине сделать можно.
Ну вот. И тогда можно водичкой поливать бактерии. Берешь из морозилки в -80 градусов три-четыре пробирки бактерий, размораживаешь, и туда пипеткой свою магическую водичку заливаешь. Добавляешь SOC-медиум, питательную жидкость, чтоб им там было чего жрать, и ставишь на 30 минут в 37 градусов болтаться. Только сначала надо их шокировать маленько, чтоб они вектор всосали. Для этого надо их поставить на 2 минуты в 42 градуса. Вот в такой машине.
SOC медиум. Кому интересно, в википедии написано, как его делать. На английском. Но химия все равно же понятно.
Ну вот. А когда бактерии в медиуме освоятся, минут через 30, их надо взять и отжать. Чтобы выпали в осадок. И их собрать можно было, как семена, и потом посадить расти в чашку Петри на ночь. Отжать можно в центрифуге. Центрифуга - это такая аццкая машина, которая может вертеться с какой-то невообразимой скоростью. Например, 15 тысяч кругов в минуту. Или 20 тысяч. Но для бактерий можно всего 12.000, на одну минуту поставить. Вот сюда, в черные дырочки.
И когда бактерии отожмутся, настает самое интересное. Потому что их можно взять и посадить расти в чашки, как рассаду. Все женщины любят садить рассаду, правда же? Ну ладно, не знаю про рассаду, но бактерии садить любят уж точно наверняка все женщины. Потому что там надо зажечь огонь, обмакнуть металлический треугольник в спирт, и поджечь его. Восхитительное зрелище, никогда не надоедает. Вот все эти центрифуги, вертелки-сопелки надоедают, а спирт жечь почему-то никогда не надоедает.
Но в общем потом, когда спирт обгорит, надо этой штукой бактрии ровным слоем по чашке размазать.
Там есть много хитростей, чтобы правильное количество, чтобы их не обжечь горячей палкой этой и так далее, но в общем ничего сложного. Да и в принципе, по-моему, бактерии сажать можно разными способами. Этот просто прикольный.
А потом их надо на ночь поставить расти в инкубатор в 37 градусов. Вот такой. Вот они там на верхней полке в тарелках сидят.
А утром потом они вырастают. Вот эти белые точки называются колонии. Их можно собирать и дополнительно культивировать, чтобы получить много-много бактерий с кучей своей ДНК. Бактерии же, когда размножаются, всю ДНК копируют. И твой плазмид тоже. Бесплатная копировальная машинка такая.
Только это плохой пример с колониями, их обычно больше, но у меня нету фотки с хорошим. Можете погуглить, но я там шибко красивого примера тоже не нашла.
Но мне все эти предметы глаза уже намозолили. И я не могу определить, что может вообще человек думать, когда ему вот такое рассказывают и показывают. Расскажите мне, что ли? Что вы подумали.
Хотя всего сто лет назад - ну что такое 100 лет в масштабах жизни человечества? - это было даже не научной фантастикой, а просто больным бредом, наверное.
ДНК по интернету.
Да что там 100 лет назад! Вот попробуй я хотя бы объяснить это своему деду... с какого места к этому объяснению подступиться-то... да.
Ну да, все так и есть, заходишь на вебсайт, там форма, заполните, мол, свои данные, давайте свою последовательность, какая у вас там, GATCAGATTTCCCGAGTCTACGATTT? Пожалуйста! Получите с доставкой на дом через полтора дня.
Да.
Ну, ДНК с доставкой получают не просто так, а для специальной цели. Какую попало ДНК нафиг надо, правильно? Что с ней потом делать будешь... А получают в пластиковых пробирочках, размером вот с женский мизинец. И в виде сухого порошка. Только это так говорится - "в виде", а на самом деле никакого вида там нет. Она, ДНК, невидимая потому что. Во-первых, ее мало, а во-вторых, она прозрачная. Поэтому заказал ты, значит, свою ДНК по интернету, пришли тебе два пластиковых женских мизинца, а в них нифига и нет.
Но ты этим не смущаешься, потому что все это сопровождается суровыми бумагами. Вот такими.
Там как следует написано, что в пробирках - ДНК! А надо только ее разбавить буферной жидкостью, и будут тебе самые что ни на есть олигонуклеотиды в растворе.
Только тут тоже хитрость есть. Ведь всякому ясно - ты старался, деньги тратил, покупал какой-то порошок невидимый в пластиковых пробирках, а тут теперь его возьми и разбавь! А ну как он весь по стенкам размазан - почем ты знаешь? Не видно ж нифига! Надо бы его как-то стрясти на дно, и потом уж разбавлять, не боясь, что все это зря.
Но руками ты никак невидимый порошок на дно не стряхнешь. Кто градусник советский тряс в детстве, тот знает - градусник с этой еле видимой металлической ртутью и тот трясти надо уметь. А когда еще и не видно, что трясешь, как трясешь - совсем дело плохо. Поэтому и тут физики напряглись и придумали специальную машину. В нее вставляешь пробирки, а она их раскручивает с большой силой. И весь порошок, или вся жидкость на дно пробирки эффективно сваливается. И даже проверять ничего не надо. Пара секунд - и пожалуйста. Очень удобно. На кухню такую хочу. Эту вот, и еще одну - "вортекс" называется. Для тряски. Когда что-то размешать надо, можно это руками трясти вверх-вниз изо всех сил, как дурак, а можно вот поставить на вортекс на две секунды - и готово, размешает почти что угодно в растворенную пыль - за счет мелкой вибрации. Это тебе не яйца вилкой в стакане крутить для омлета. Да.
Вот это крутилка в крутящемся состоянии. Белое такое размазанное - это с большой скоростью крутится. "Iwaki" написано. А справа vortex - такая черная нашлепка на метллической коробке. На нее рукой прямо ставишь пробирку и прижимаешь, и она вместе с рукой вибрировать начинает от надавливания. И в пробирке все размешивается.
Ну и вот.
Они, нуклеотиды то есть, как правило чего-нибудь означают. Например, они могут означать из себя сигнальную последовательность. Про то, что ЭТО, в котором эта последовательность есть, надо отнести в какое-нибудь место клетки. Например, в ядро. Ну то есть, это наклейка такая - "нести в ядро". Только эта наклейка обозначается такой кучей букв, типа AGATCTACGTACGCA. Химически. Такая вот она.
И вот.
И эту наклейку можно куда-нибудь вклеить. Во что-нибудь. В какой-нибудь протеин. То есть, в код этого протеина. Чтобы потом этот протеин взял и набрался целою кучей в ядре. И светился там зеленым, понимаешь, светом. Чтобы его сфотографировать можно было и фотки куда-нибудь послать или на стену повесить. Вот такие.
Но чтобы все это сделать, надо как минимум сначала свою ДНК склеенную размножить. В бактериях. Например, XL1-Blue. Eschericia coli.
Я вот думаю: что будет, если XL1-Blue в глаз попадет? А то мне попадало. Генное, понимаешь, модифицированное. Но ничего не было. Говорят - иммунная система.
Ну так вот.
Генетики оперируют микролитрами. Микролитр - это такая мелкая капля, что ее и слизнуть-то стыдно. И самое в ней паскудное то, что она на глаз ну ваще практически не отличается от капли в 2 микролитра. То есть накапать на глаз - нет, ну, прямо скажем, никакой возможности! Тем более что иногда надо бывает 0.5 микролитра. Или даже, страшно подумать, 0.3.
Поэтому для правильного накапывания придумали специальные пипетки. Без них вообще ничего бы не удалось. Совсем. Но даже и с ними, прямо я вам скажу, дело туго идет. Ну раз накапать, два накапать - ладно. Но когда 16 пробирок, и в каждую по 5 реактивов, и после каждого наконечник менять - рука отвалится начисто к чертовой матери. Но с пипетками, во всяком случае, можно как-то микролитры отмерять, этого не отнимешь. Микролитр - это вот на кончике этого желтого набалдашника в длину от конца с четверть-ногтя.
Наконечники, которые надо сменять. Пластиковые. Капнул - сменил - выкинул, капнул - сменил - выкинул. Страшное дело.
А накапывают, например, сюда. Рука чисто для масштаба. Это, если мне не ошибает память, 50 микролитров внутрях находятся.
Еще можно вот сюда накапывать. Это называется "эппи" - eppendorf tube.
Чтобы приготовить вектор со своей ДНК, надо взять уже готовый вектор (которые тоже - эка невидаль - продаются), и произвести с ними магические манипуляции. Накапать туда то одной жидкости, то другой, подержать то в тепле, то в холоде (где 16 градусов на 30 минут, а где и комнатной температуры на 5, а когда и два часа 37 градусов - сии магические указания свято хранятся и передаются от учителя к ученику, причем ученик своею ручкой пишет свою собственную колдовскую книгу, и называет ее протоколами), и тогда - трах-тибидох-тибидох! - получится магическая водичка!
А 16 градусов вот в такой машине сделать можно.
Ну вот. И тогда можно водичкой поливать бактерии. Берешь из морозилки в -80 градусов три-четыре пробирки бактерий, размораживаешь, и туда пипеткой свою магическую водичку заливаешь. Добавляешь SOC-медиум, питательную жидкость, чтоб им там было чего жрать, и ставишь на 30 минут в 37 градусов болтаться. Только сначала надо их шокировать маленько, чтоб они вектор всосали. Для этого надо их поставить на 2 минуты в 42 градуса. Вот в такой машине.
SOC медиум. Кому интересно, в википедии написано, как его делать. На английском. Но химия все равно же понятно.
Ну вот. А когда бактерии в медиуме освоятся, минут через 30, их надо взять и отжать. Чтобы выпали в осадок. И их собрать можно было, как семена, и потом посадить расти в чашку Петри на ночь. Отжать можно в центрифуге. Центрифуга - это такая аццкая машина, которая может вертеться с какой-то невообразимой скоростью. Например, 15 тысяч кругов в минуту. Или 20 тысяч. Но для бактерий можно всего 12.000, на одну минуту поставить. Вот сюда, в черные дырочки.
И когда бактерии отожмутся, настает самое интересное. Потому что их можно взять и посадить расти в чашки, как рассаду. Все женщины любят садить рассаду, правда же? Ну ладно, не знаю про рассаду, но бактерии садить любят уж точно наверняка все женщины. Потому что там надо зажечь огонь, обмакнуть металлический треугольник в спирт, и поджечь его. Восхитительное зрелище, никогда не надоедает. Вот все эти центрифуги, вертелки-сопелки надоедают, а спирт жечь почему-то никогда не надоедает.
Но в общем потом, когда спирт обгорит, надо этой штукой бактрии ровным слоем по чашке размазать.
Там есть много хитростей, чтобы правильное количество, чтобы их не обжечь горячей палкой этой и так далее, но в общем ничего сложного. Да и в принципе, по-моему, бактерии сажать можно разными способами. Этот просто прикольный.
А потом их надо на ночь поставить расти в инкубатор в 37 градусов. Вот такой. Вот они там на верхней полке в тарелках сидят.
А утром потом они вырастают. Вот эти белые точки называются колонии. Их можно собирать и дополнительно культивировать, чтобы получить много-много бактерий с кучей своей ДНК. Бактерии же, когда размножаются, всю ДНК копируют. И твой плазмид тоже. Бесплатная копировальная машинка такая.
Только это плохой пример с колониями, их обычно больше, но у меня нету фотки с хорошим. Можете погуглить, но я там шибко красивого примера тоже не нашла.
Но мне все эти предметы глаза уже намозолили. И я не могу определить, что может вообще человек думать, когда ему вот такое рассказывают и показывают. Расскажите мне, что ли? Что вы подумали.
![[identity profile]](https://www.dreamwidth.org/img/silk/identity/openid.png){kind=small}
no subject
Date: 2012-12-15 01:48 am (UTC)no subject
Date: 2012-12-15 01:52 am (UTC)no subject
Date: 2012-12-15 02:08 am (UTC)no subject
Date: 2012-12-15 07:52 am (UTC)И если надо встраивать то это надо взять у бактерии ДНК всунуть свой кусок и обратно запихать?
Или ветор это и есть ДНК нужной бактерии?
no subject
Date: 2012-12-15 08:34 am (UTC)Вектор - это кусок днк, который засовывают в бактерию. Он обычно искусственно смонтирован специально вот чтобы в бактерии совать. Он кольцевой, и в нем есть разные места для разных целей, например место для нарезки (если хочешь его нарезать), место для начала копирования (потому что копирование всегда с определенного места начинается) и т.д.
no subject
Date: 2012-12-15 08:38 am (UTC)no subject
Date: 2012-12-15 03:52 pm (UTC)no subject
Date: 2012-12-16 07:50 am (UTC)