(no subject)

[aridmoors]

Очень интересный день. У меня в лаборатории произошел взрыв!!! Небольшой. Очень интересно!

Короче, человеческие перепрограммированные стволовые клетки почему-то хранят в жидком азоте. Я не знаю почему. Я даже не знаю, это только наша лаба так, или так все. Вообще клетки гораздо удобнее хранить просто в морозильнике, можно на -80, можно на -150. В википедии написано, что жидкий азот не взрывоопасен - сегодня я на собственном опыте убедилась, что это неправда.

Мне на первое время дали задание научиться культивировать эти клетки (утверждается, что это очень сложно, вот посмотрю) - ну и я должна была доставать пластмассовые пробирки с клетками из жидкого азота, который почему-то целыми бадьями стоит в подвале - бадей так штук 50 разом в одной комнате. Под зданием. Ну и потом эти клетки нести наверх в лабу, там растаивать и сеять в тарелку.

Я, ничего не подозревая, сделала все так, как меня перед этим учили, и как я наблюдала сама: берешь пробирку с клетками, несешь, потом, взяв пробирку за верх рукой, погружаешь ее (пробирки) нижний конец в теплую воду в разогретой ванночке - и типа клетки оттаивают.

На самом деле происходит не это!!! На самом деле когда вы одной рукой берете пробирку с клетками из жидкого азота и погружаете ее нижний конец в нагретую воду, происходит БАБАХ!!!!

Бабах произошел довольно сильный. Ванночка с водой стояла на столе, я перед ней, и меня окатило водой, все лицо мокрое, волосы. На руке, на МЯГКОЙ, внутренней поверхности - синяки. Я вообще не знала, что это возможно, посадить синяк на ПОДУШЕЧКУ пальца и мягкую поверхность ладони. 0_о

В целом в это время в лабе больше никого не было, поэтому никто ничего не заметил. Я очень удивилась, восхитилась, и подумала гипотезу, что это произошло потому, что когда пробирку кто-то закрывал, он это сделал не как следует, и жидкий азот в нее проник, и поэтому при нагревании он резко расширился, и пробирку разнесло начисто. Другого варианта не вижу.

Со второй пробиркой была осторожнее. Сначала нагрела при комнатной температуре, медленно. Из нее повалил пар, из-под крышечки. Явно кто-то плохо закручивал эту серию, вот что за люди. Хорошо ничего не случилось, а если б в глаз? Запросто могло в глаз осколком. Хорошо вообще что пробирки не стеклянные, а пластмассовые.

А вообще дебильная практика - хранить в жидком азоте. Если они всегда так делают, чего они тогда потом удивляются, что половина клеток не выживает при заморозке - дак вы когда размораживаете, вы прикиньте давление там на клетки этим азотом, а? Там слона убить можно, не то что клетки. Пробирку из сверх-толстой пластмассы разнесло в клочья, и еще и по руке мне так ударило. Что там от клеток может остаться вообще? Кто это придумал

Comments

[kainis-dk.livejournal.com]

Уууу =D По-любому азот внутрь попал.

[http://users.livejournal.com/_aristeo/]

Азот попал внутрь, при нагревании он закипел, и пробирку разорвало, как паровой котёл. Собственно, это не взрыв азота (который и правда не взрывается), а разрыв сосуда под давлением пара.

Надо отвинчивать крышки перед нагреванием, тогда такого не будет.

EDIT: Собственно, понял, как всё произошло. Вы говорите, что "из-под крышечки повалил пар" - значит, она была плотно, но не герметично прикручена. Скорее всего, в пробирке был жидкий кислород - из воздуха. Если поместить пробирку в жидкий азот, то кислород в ней будет сжижаться - его температура кипения выше. Внутри при охлаждении, естественно, падает давление из-за сжижения кислорода. А т.к. крышка неплотно прилегает (из-под неё может пойти пар), то внутрь постепенно засасывается воздух и снова сжижается там. И когда вы стали нагревать пробирку, внутри неё резко образовалось гораздо больше газа, чем помещается при нормальных условиях. Вот она и жахнула. Точно надо крышку открывать перед нагреванием.

[aridmoors.livejournal.com]

Меня когда учили, там крышку не отвинчивали, я как научили, так и делала, лаба чужая, зачем я буду протокол менять.

А вообще со второй пробиркой я попробовала крышку отвинтить - она примерзла, это нереально.

[http://users.livejournal.com/_aristeo/]

ИМХО, если крышка неплотно прикрыта, то это нарушение ТБ при помещении в жидкий азот, и о таком лучше сообщить, чтобы все знали, как делать нельзя. Мало ли у кого ещё жахнет.

[caseynew.livejournal.com]

Причиной фазового взрыва мог быть любой компонент при должном градиенте температур.

[p2004r.livejournal.com]

Очки защитные наше всё при любых работах.

[pharmazevt.livejournal.com]

У некоторых (большинства) типов CryoVials в инструкции конкретно сказано, что их можно держать только в газовой фазе дьюара, в жидкость не опускать - именно из-за того, что бывают такие взрывы. Чтобы хранить в жидкой фазе, их надо запаивать в особые пластиковые трубочки.
Там, где покупают агарозные гели, как правило, таких тонкостей не понимают.

PS. это, надеюсь, не в обычных эппендорфах было? Вы пишете "пар повалил из-под крышечки", но у криофлаконов крышечки на резьбе и с прокладкой, из-под них особо ничему не повалить.

[aridmoors.livejournal.com]

На резьбе там были. Но тот, кто делал, не закрутил как следует.

[ecnovo.livejournal.com]

Имел длиииииинную беседу со спецами по охране труда, когда они заметили дьюар с азотом в зарытой кладовке. Объяснили, что азот, при всей своей безвредности, вытесняет кислород при испарении, и, так как человек никак это не ощущает, есть риск просто задохнуться в таком помещении. А потому есть инструкция, как надо хранить жидкий азот, а как - не надо. Если у вас он "бадьями" в подвале... Интересно, у вас нет таких правил?

[scholarpunk.livejournal.com]

Там вентиляция специальная должна быть, отдельные, специально оборудованные вытяжкой помещения... Потому и хранятся в "одном месте".

[randomisator.livejournal.com]

Просто должен быть сенсор концентрации кислорода и вентиляция. У нас вон в хатче круглосуточно 60 литров жидкого азота с автоматическим доливом по мере испарения, и ничего, ни одно safety не расстраивается.

[aridmoors.livejournal.com]

Ну или так...

[aridmoors.livejournal.com]

Там, где раньше работала - были. Там нельзя было наливать жидкий азот в комнате с закрытой дверью вообще. Здесь таких правил нет. Видимо, контролирующие организации еще не обнаружили этот косяк. Я тоже удивилась, когда мне показывали процедуру - мы с чуваком заходим такие в подвал, там 50 бадей в комнате, все с жидким азотом, дверь на секьюрити и открывается только карточкой, ни телефона срочного контакта на стене, ничего нет, мы заходим, дверь за нами захлопывается и закрывается, чувак как ни в чем не бывало ставит на пол свой сосуд, берет маленькую бадью с азотом, и так - хоба-на - наливает литра три прям так, как за здорово живешь. И дальше это стоит открытое, из него валит пар, а он закрывает маленькую бадью с азотом и начинает рыться в большой, чтобы найти нужные клетки... я прифигела, но думаю раз тут так делают, значит так надо...

[gateya.livejournal.com]

У нас в одном из мест, где я работала, огромная бочка вообще, кажется, на улице стояла, и от нее шланг шел сквозь стену. И там в этом помещении окна были.

[randomisator.livejournal.com]

Огромная - это стандартная трехэтажная от Praxair? Это как раз самое надёжное:) Хотя окна конечно ради приличия стоило бы убрать.

[gateya.livejournal.com]

Не, это была цистерна во дворе института вакуумной техники

[gateya.livejournal.com]

Куда окна убрать?....

[autumn-jp.livejournal.com]

а там видно не было, что азот внутри?
делала наоборот: ампулу после синтеза прямо из печи (750 цельсия) в азот опускала - ничего не взрывалось )

[scholarpunk.livejournal.com]

О, я тут думал разразиццо своими лжепсевдокриоиологиццкими знаниями, но тут уже все практически разъяснили.

А при -80 хранить можно максимум МЕСЯЦЫ, ну лет пять. Но что подооодже - уже не рисуют обычно При -140 хранить попросту НАМНОГО ДОРОЖЕ. На электричестве разоришсо, и обязательно надо следить, чтобы не было поломки или отключения питания. В таких холодильниках обычно аварийные системы предусмотрены (какрасс жидкоазотные, ггыгы), чтобы, значит, ежели шо случится, то сутки были реагирование...

И даже, кстати, с "в газовой фазе" поверх жидкого азота хранить - и то дороже, потому как расход жидкого азота больше, чем просто в толще.

А по поводу случившщегоя - тут нужно обязательно заявить, так как явно имеет место нарушение техники безопасности из-за неправильного хранения.
Не должно быть такого вот этого! Не знаю кк в япони, а в америке засудить, наверное, можно было бы всякого стречного и поперечного по этому поводу...

А размораживать надо, пока там не останется последний мааааленький кусочек льда, а потом вынимать, он дотает сам, пока криопробрку до ламинара донесешь и теплой культуральной средой разведешь заполнишь, и повреждения клеток будут меньше (оно при согревании основные повреждения имеют место быть). А там дальше - как вы делаете? Надо от криопротекторов освобождать. Как у вас делается? Обычно центрифугируют 5 минут при 100-300 G, чтобы только осело вниз, и пеллет в культуральной среде ресуспендируют, и так раза два, штоле, и по флаконам... Но я тупо после однокрмтноого центрифугирования засевал фо флаконы

А давления в пробирках вообще никакого - там воздух сжижается, а поверх него вакуум.

И, кстати, если криопробитки нормальные и завинчены правильно - то я вот тупо прямо в жидком азоте хранил, и ничего не проникало... Правда, у меня там все практически самодельное было, ну и протоколы самопридуманные (но строгие! когда культуральшица из москвы приехала - так аж охренела немношк), книжки со статьями почитал, и сам "по инструкции" самоучкой всё освоил. На уровне "при помощи купленной у цыган астролябии самостоятельнопришел к концепции сферичности Земли"(ц) Маркес.

Хотя строгие-нестрогие, а руку по локоть в жидкий азот, чтобы достать упавшее, пару раз сувал...

Но просто надо знать, что и как в какой степени можно "нарушать" - тогда можно и нарушать. А кто не знает, у того ожоги азотом... И взрывы в лаборатории, ггыгы.

А так - ребенок пятилетний с восторженными визгами колотит молотком зихоложенное в жидком азоте яблоко на красивые осколки, ну и газировку с жидким азотом вмпесто дьда можно пить, выдыхая клубы пара, вот это всё.

Людей пугать до полусмерти, опять же...

Главное, ТБ соблюдать!

[sciuro.livejournal.com]

Всё так. У нас у коллабораторов только что сдох пятилетний банк образцов, потому что кто-то пожадничал поддерживать температуру в дьюаре -160, решили, что и -130 хватит, чтобы в парах хранить пробирки. Мол, заправлять реже, дешевле выйдет.
И вот те коробки, что на самом дне были, те выжили кое-как, а верхние сдохли начисто. Мы набрали из разных коробок образцов для эксперимента, вместо ожидаемой 80-90% выживаемости получили почти идеальную линейную зависимость от глубины залегания. У меня проект на полгода отодвинулся из-за этой экономии :(

[gateya.livejournal.com]

"вместо ожидаемой 80-90% выживаемости получили почти идеальную линейную зависимость от глубины залегания" - извините, я понимаю, что это очень неприятное событие, но почему-то смешно очень с этой почти идеальной линейной зависимостью..:)))

[aridmoors.livejournal.com]

Ммм... ну я не знаю этих нюансков про электричество, я просто знаю что во всех японских лабах, где я была, есть морозильники на -150. Как бы если они и так есть, почему там не хранить, я из этих соображений.

Да, в -80 я как правило храню всегда WS (working stock), с которым все время работаю. Они там месяцами не залеживаются.

Как надо размораживать iPS клетки - это не мне их учить, это я у них учиться должна, вот как мне сказали, так и размораживаю. Потом опыта будет побольше, тогда буду изобретать свои протоколы.

[scholarpunk.livejournal.com]

Что же по поводу разморо-ки - там соверенно не важно, iPS, или еще какие клетки... Есть культуры более дубовые (кстати,стволовые клтки - они весьма дубовые и криоконсерваию переносят хорошо), а есть более капризные - а так все то же самое.

Ну если, конечно,не эмбрионы какие витрифицированные, там другой принцип немножко (так-то оно любая криокнсервация - в конечном счете витрификация с концентрированном растворе солей, вытесненных из окружающих кристаллов льда).

А молрозильники на -150 - ну, там они же не просто так, есть чего туда и помимо криоконсервированных клеток положить?

Вон, в Японии сколько автомобилей, автобусов и грузовиков. А почему-то от метро с поездами ни спешат отказываться..

[aridmoors.livejournal.com]

Нет, вы зря утверждаете. Вы с этими клетками не работали, вы хз как они себя ведут

[scholarpunk.livejournal.com]

Читал. Но - про эмбриональные стволовые, и МСК костномозговыми, и ММСК, которые мезенхимальные мультипотентные стромальные - а на самом деле вообще черт-те што, хренова туча разыхъ субпуляций). В общем, такое впечатление - что чем больше "стволовость", тем лучше выживают...

А иПСК, конечно, подозрительные... Но ежели и впрямь таки стволовые, значит и впрямь можно считать, что переносят относитеольно хорошо.

Типа, ежели лиса с волком мясо жруть, значит можно ожидать, что и шакал не подавиццо!

[tunchzi-al.livejournal.com]

Мы храним HEK293T тупо в эппендорфах в азоте. Правда, в криопротекторе из культуральной среды с DMSO. Не взрываются. Клетки из азота луче подходят для сборки лентивирусных векторов, чем из холодильника.

[diakin.livejournal.com]

Хм.. А на что были перепрограммированы эти клетки? А если они попав в организм оживут? Ж8-()
зы. У нас так однажды бутылка шампанского взорвалась. "Детское.., блин ..игристое"

[aridmoors.livejournal.com]

Перепрограммированы на плюрипотентность
https://en.wikipedia.org/wiki/Induced_pluripotent_stem_cell

Не оживут. Во-первых, иммунитет среагирует на чужое, а во-вторых, эти клетки и так всегда полудохлые - это целая проблема.

[levgilman.livejournal.com]

"Пробирку из сверх-толстой пластмассы разнесло в клочья, и еще и по руке мне так ударило. Что там от клеток может остаться вообще?"

А что клеткам вообще может сделаться от равномерного давления? То есть эффекты разные можно допустить, но какое отношение к этому имеют впечатляющие разрушения, вызванные ПЕРЕПАДОМ давлений?
Да и соответствовало ли давление "сверх-толстой пластмассе"? Если она не была предназначена выдерживать давление, то наверняка выдержала намного меньше, чем могла "по толщине".


И какое ещё "давление азота" в нормальном случае? Не знаю как их по технологии замораживают, может там какое-то давление и применяется, но этого Вы не объяснили, а то "давление азота", которое понятно из текста - в норме возникать не должно.

[viktor-privalov.livejournal.com]

Так это у вас вода теплая взорвалась!
Хотя Википедия также утверждает, что она не взрывоопасная.

Это что за лаборатория дикая в которой нарушается элементарный здравый смысл и школьный курс физики. Так то всякое охлажденное тело при подобном нагревании в сони градусов деформируется.

[alexanderr.livejournal.com]

а еще я работал с жидким гелием

один раз у баллона замерз клапан для выхода лишнего газа,
и он стоял долго без присмотра вообще. решили, что ага внутри
наверное теперь дикое давление. выкатили в коридор. полицейский
без шуток стрелял в баллон из пистолета с безопасной дистанции.
но все обошлось, внутри оказалось пусто. клапан замерз когда уже все давно вышло

но вообще да, они иногда взрываются. после одного такого взрыва
проект прикрыли как ненужный, вот ты продашь компьютер, а там
он у них начнет взрываться.

[protey-009.livejournal.com]

Сам не сталкивался, но тб–шники очень любят расказывать об оксигенитах. При хранении жидкого азота, на дне дюрара скапливается жидкий кислород, конденсирующийся из воздуха. С органикой (пластик) он образует нестойкие взрывчатые вещества – оксигениты, которые могут детонировать при нагревании. Синяки на ладонях – очень похоже на действие ударной волны. У меня такие были когда NH4I:NI3 в руках взорвался по молодости :–)