(no subject)

[aridmoors]

Завтра иду участвовать в исследовании в качестве подопытного кролика, в ту же самую лабу, в которую уже ходила. Теперь исследование называется "как человек реагирует на приказы под воздействием боли" и длится не 10 минут, а 3 часа. Как сказал Ян,

- ага, а в процессе они попутно узнают все внутренние секреты Российской Федерации...

Мне даже интересно, что они собираются там делать со мной 3 часа.

Днем мы сидели в темной комнате с микроскопами, и я смотрела, как француз фотает клетки. Было прекрасно и удивительно наблюдать, как человек, который никогда не учился технологии, пытается ее самостоятельно изобрести. Сразу становится видно, насколько это нереально в биологии. Насколько в действительно надо много учиться у кого-то. Потому что большая часть мелких технических деталей нигде не описана. Где вы найдете информацию о том, как выглядит антитело, которое не работает? Во всех журналах публикуется только то, что работает... Так что тут человек вообще не знал, что антитела бывают неработающие. Когда я сказала, что из всех продающихся антител, скорее всего, 50% неработающие, он не поверил.

- А...а...а... а почему они тогда их продают?.. - спросил растерянно.
- Да тут, к сожалению, ответ как в анекдоте, - сказала я, - потому что они это могут.

А еще я нашла способ делать наши клетки плюрипотентными в 2 раза быстрее. То есть я не меряла, во сколько именно раз быстрее. Наверное, надо померять. На всякий случай, чисто из гальтоновского побуждения мерять всё. Сомневаюсь, чтобы из этого вышло что-то путное. Чтобы вышло что-нибудь путное, надо мерять как Гальтон: много, много, много параметров. А я много не знаю, и придумать не могу.

Или могу.

Не уверена.

Вечером я спустилась в комнату с микроскопами на втором этаже, и нашла там сенсея, читающего мангу в кресле.

Comments

[mayskaya-groza.livejournal.com]

А как выглядит неработающее антитело?

[alexispokrovski.livejournal.com]

Мне даже интересно, что они собираются там делать со мной 3 часа.

Гусары, молчать!

Ну как же, у японцев есть даже специальная порно-манга. Вот это и собираются :-) под воздействием боли :-))

post

[livejournal.livejournal.com]

User molchun22ru referenced to your post from post (http://molchun22ru.livejournal.com/232062.html) saying: [...] Оригинал взят у в post [...]

[zaharov.livejournal.com]

Да-да, вы бы поинтеросовались, что они там за мангу читают, а то эксперимент какой-то стремный : )

[aridmoors.livejournal.com]

Наше - вот так (думаю что оба там не того в данном случае, погоду показывают)

Ну то есть надо учитывать, конечно, что и красное и зеленое в данном случае должны были изображать трансмембранные протеины, по меньшей мере один из которых (красного цвета тут) зашкаливает по данным ПЦР, т.е. вот так пережигать лазером чтоб только увидеть - это бред


(https://postimg.org/image/roxwxbjmf/)

[vadperez.livejournal.com]

все зависит от того против какого участка белка антитело. Если против цитоплазматического, а клетку не пермеабилизировали, то...
И, гм, проверку в этом случае надо делать вестерном, а не пцр:В

[mss-mila.livejournal.com]

Звучит стремно, вы смелая

Насколько в действительно надо много учиться у кого-то
_____________
Да-да-да-да. Люди учатся у людей,
наш шеф этого не понимал никогда, и принципиально считал, что в одиночку, с нуля, без опыта с книжкой человек должен уметь сделать ВСЕ.

[aridmoors.livejournal.com]

Проверку нам надо будет делать всем, не только вестерном. Мы пытаемся показать EMT, а это такое скользкое дело, что там надо будет задействовать все, и вестерн, и ПЦР, и иммуно, и все что только можно, включая эссе инвазивности и миграции. Но! Вестерн тоже ведь зависит от качества антитела, а ПЦР независимая техника.

Клетку пермеабилизовали, все в порядке все под моим контролем, я дала вылизанный личный протокол.

[vadperez.livejournal.com]

оу, на одноклеточном слое? сейчас вроде есть всякие микрофлуидикс камеры, которые позволяют взращивать эпителий и наблюдать за ним (в последнем не уверен, но почему бы не сделать?) - по-моему более близкая система, чем просто клетки в чашке.
хочу эссе про инвазивность и миграцию))
зы. вроде оба белка там мембранные? - почему тогда метятся все ядро и чуть ли не вся цитоплазма? или это техника такая?

[mayskaya-groza.livejournal.com]

Спасибо!
Буду думать.

[aridmoors.livejournal.com]

Да, я тоже думаю, что все это жутко искусственно и совершенно нереально. Тем не менее тут есть два варианта - или идти высоко-высоко, и тогда надо не только взращивать эпителий, но и в идеале пересаживать потом получившиеся клетки реальным мышам и смотреть насколько у них что разовьется. А это уже совсем слишком много работы и времени, у нас столько нет. А если мышей не делать, то особого смысла в тканевом подходе нет, т.к. высоко все равно не напечатают, щас уже нереально с раком напечататься высоко без мышей. Ну разве прям супер че-то открыл.

Да, белки там cadherins, и должны давать мембранный сигнал. Ядро и цитоплазма метятся потому, что я подозреваю, что на эти белки хрен сделаешь нормальное антитело. Я помню, что в Киотском универе (там была мембранная лаба) мне сенсей говорил, что на трансмембранные белки антитела особенно плохие, по его опыту. Я когда туда пришла, я тоже подходила к нему с горящими глазами и говорила "а давайте купим вот это антитело, смотрите сколько их продается, мы быстренько купим и покрасим!", а он мне сразу сказал: во-первых, прежде чем тратить деньги на любые антитела, возьми за привычку удостоверяться более дешевыми способами, а во-вторых, никогда не покупай антитела неизвестно откуда. Вот принесешь мне статью с ну очень красивой картинкой, вот покажешь мне название компании и номер в каталоге того антитела, которое конкретно для этой картинки использовалось, вот тогда я подумаю, а просто так я тебе ничего покупать не буду в принципе, т.к. слишком много неработающего, а одно антитело - это 500 баксов, пардон, чтобы их так на ветер выкидывать.

Я ему поверила на слово, но удостовериться в этом у меня появилась возможность только в Швейцарии, где в лабе было очень много денег, но гораздо меньше опыта, и они покупали очень много всяких разных антител. Там я впервые узнала, что например компания Санта Круз (в Японии известная как производитель почти эксклюзивно неработающего дерьма) почему-то одна-единственная производит одно-единственное существующее на рынке хорошее антитело к Sox10. Остальные компании производят это антитело так, что оно либо не красит, либо красит то, чего нет (подбирает и красит по дороге также и Sox9, т.е. недостаточно специфическое). Почему это так - знает только Господь Бог, т.к. компании не разглашают свои способы производства антител, и они у всех разные, и дают разные результаты.

Еще я узнала, что антитела бывают разные по уровню хорошести. Бывают антитела, которые можног покупать хоть у сапожника - например, тубулин. Их видимо настолько легко производить и они так хорошо работают, что их можно реально покупать у кого угодно. Есть более хитрые антитела, которые от одних компаний работать будут, а от других нет, и надо реально знать, у кого брать. А если антитела, которые вообще не работают. Никогда. Например, Lgr5. Что интересно - оно тем не менее все равно везде продается. Но мы плотно работали с лабой, которая очень долго и упорно выясняла, работают они или нет (купили у всех компаний целую батарею этого антитела, и долго проверяли), и выяснили, что они ни у одной компании не работают на иммунопокраске, а на вестерн работают только у пары компаний. А еще тоже деталь: почему-то на вестерн антитела всегда работают лучше, и иногда на сайте компании указано "годится для всего", а фотка вывешена только вестерна. Так вот в этом случае надо beware! Иногда это специально.

Вот в общем все это нигде не написано и этому почему-то никто не учит, и как бедному челу все это узнать - совершенно неясно. А незнание этого в том числе и тормозит науку. Потому что люди тратят время, пишут статьи, потом посылают в дурнал, оттуда им приходит "все переделайте", и потом расстройства, опоздания, ухудшающиеся шансы в карьере и общее падение качества жизни и исследований.

[vadperez.livejournal.com]

ценный опыт по антителам! ради одного его стоило побыть в Швейцарии.
Хороший новый термин - дурнал;)
А EMT у вас там как модель развития рака?
Ну и да - главное по-быстрому напечататься, потом дышать легче

[aridmoors.livejournal.com]

EMT у нас как состояние клетки. Типа клетка прошла через EMT и перешла в состояние инвазивности. Ну или сопротивляемости химиотерапии, так точнее будет. Мы разрабатываем способ простой, дешевой и точной диагностики наличия таких клеток в опухоли.

[vadperez.livejournal.com]

а как там отличить, что это рак, а не развитие здоровой ткани?

[aridmoors.livejournal.com]

Эм... ну потому что клеточные раковые культуры сами по себе никогда не становятся вдруг здоровыми?

Мы берем эпителиальные клеточные раковые культуры и в тарелке делаем их мезенхимными через EMT. Затем ищем нужный нам класс маркеров.

Насколько это все имеет смысл - хрен его знает, как бы и сейчас тоже можно маркеры находить через IHC, но типа вот, новый метод будет. До кучи. В целом я не специалист в этом конкретном проекте, проект по микрофлюидной сортировке, я там участвую как специалист по характеризации раковых клеток и по EMT induction, т.к. я единственный в лабе хардкорный биолог с опытом в раке и биологической микроскопии, в том числе в клеточной культуре и тканях.

[vadperez.livejournal.com]

не-не-не! про культуру все ясно, я - про организм: в нем как отличать?
а то у нас в лабе был такой проект, типа "разработка крысиного яда. Применение: поймать крысу и засыпать яд ей в нос, ждать смерти крысы".
либо сразу там ограничивать область применения метода.
*
"микрофлюидная сортировка" - а, ок, не обратил внимания.

[sciuro.livejournal.com]

Кстати, Санта-Крузу-то каюк, слышали?
http://www.santacruzsentinel.com/article/NE/20160523/NEWS/160529886

[aridmoors.livejournal.com]

Капееееец. Как они зае.. эти защитники прав животных. Вот реально людям делать нечего по жизни, нечем заняться как бегать и "животных защищать". Бесят до немогу.

[alexispokrovski.livejournal.com]

Не надо быть наивной. Все эти зеленые завелись отнюдь не от сырости и уж тем более не от любви к животным. "Люди работают."

[aridmoors.livejournal.com]

Как - не от любви к животным? А зачем им это все?

[alexispokrovski.livejournal.com]

Хороший вопрос :-) Попробую в щадящем режиме.

Движение "Гринпис" официально считает датой своего зарождения путешествие одноименного корабля из Ванкувера в сторону военно-морского полигона США, где проводились ядерные испытания.

Разумеется, человек с промытыми мозгами свято убежден, что корабль арендовали бабульки, подкармливающие котиков у подъезда. Из соображений абстрактного гуманизма. Но, вообще, представьте себе корабль, способный пересечь Тихий океан.

Когда-то и я был таким человеком.